PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類過氧化氫含量(H2O2)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),過氧化氫測試盒
過氧化氫(hydrogen peroxide),化學(xué)式H2O2。純過氧化氫是淡藍色的黏稠液體,可任意比例與水混溶,是一種強氧化劑,水溶液俗稱雙氧水,為無色透明液體。其水溶液適用于醫(yī)用傷口消毒及環(huán)境消毒和食品消毒。在一般情況下會緩慢分解成水和氧氣,但分解速度極其慢,加快其反應(yīng)速度的辦法是加入催化劑——二氧化錳等或用短波射線照射。
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過氧化氫含量(H2O2)試劑盒說明書
規(guī)格:100 管/96 樣
試劑的組成和配制:
試劑一:丙酮 100mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 3mL 濃鹽酸充分溶解備用。用不完的試劑 4℃保
存;(溶解時間較長,約 30min,務(wù)必提前準(zhǔn)備)
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;
過氧化氫含量(H2O2)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),過氧化氫測試盒
產(chǎn)品說明:
H2O2 是生物體內(nèi)zui常見的活性氧分子,主要由 SOD 和 XOD 等催化產(chǎn)生,由 CAT 和 POD
等催化降解。H2O2 不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面,H2O2 可以
直接或間接地氧化細胞內(nèi)核酸,蛋白質(zhì)等生物大分子,并使細胞膜遭受損害,從而加速細胞的衰老
和解體;另一方面 H2O2 也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。
H2O2 與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物,在 415nm 有特征吸收。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、丙酮 100mL、
濃鹽酸 5mL、研缽和冰。
操作步驟:
一、 H2O2 提?。?br />1. 細菌或細胞樣品的制備:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(10
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個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一),
超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);用試
劑一定容至 1mL;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2. 組織樣品的制備:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組
織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿;轉(zhuǎn)移至 EP 管中,用試劑一定容至 1mL,8000g 4℃離
心 10min,取上清,置冰上待測。
3. 血清(漿)樣品:直接檢測。
二、 測定步驟
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 415nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二、三和四 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。
3、在 EP 管中按順序加入下列試劑
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試劑名稱(μL) 測定 對照
樣本 250
試劑一 250
試劑二 25 25
試劑三 50 50
4000g,25℃離心 10min,棄上清,留沉淀
試劑四 250 250
加入試劑四溶解沉淀后,室溫靜置 5min,取 200μL 轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或 96 孔板中測定
415nm 處吸光值 A。對照管只要做一次即可。計算 ΔA=A 測定-A 對照。
注意事項:
1. 由于試劑一易揮發(fā),試劑一必須先預(yù)冷再加,研磨時必須在冰上研磨。
2. 本試劑盒中試劑的揮發(fā)性較高,請帶一次性手套和口罩。
三、 H2O2 含量計算:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.062x - 0.08 (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/ mL;y 為 ΔA)。
2、血清(漿)中 H2O2 含量的計算:
H2O2 含量(μmol/mL)=(ΔA+0.08)÷0.062=16.13×(ΔA+0.08)
3、細菌、細胞或動物組織中 H2O2 含量計算
(1)按照蛋白濃度計算
H2O2 含量(μmol/mg prot)=[(ΔA+0.08) ÷0.062×V1]÷(V1×Cpr)=16.13×(ΔA+0.08) ÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2)按照樣本質(zhì)量計算
H2O2 含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA+0.08) ÷0.062×V1]÷(W ×V1÷V2)=16.13×(ΔA+0.08) ÷W
(3 ) 按照細菌或細胞密度計算:
H2O2 含量(μmol/10 )=[(ΔA+0.08) ÷0.062×V1]÷(500×V1÷V2)=0.032×(ΔA+0.08)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃
度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。
b. 用 96 孔板測定 的計算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.031x - 0.08 (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/ mL;y 為 ΔA)。
2、血清(漿)中 H2O2 含量的計算:
H2O2 含量(μmol/mL)=(ΔA+0.08)÷0.031=32.26×(ΔA+0.08)
3、細菌、細胞或動物組織中 H2O2 含量計算
(1)按照蛋白濃度計算
H2O2 含量(μmol/mg prot)=[(ΔA+0.08) ÷0.031×V1]÷(V1×Cpr)=32.26×(ΔA+0.08) ÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2)按照樣本質(zhì)量計算
H2O2 含量(μmol/g 鮮重)=[(ΔA+0.08) ÷0.031×V1]÷(W ×V1÷V2)=32.26×(ΔA+0.08) ÷W
(3 ) 按照細菌或細胞密度計算:
H2O2 含量(μmol/10 )=[(ΔA+0.08) ÷0.031×V1]÷(500×V1÷V2)=0.064×(ΔA+0.08)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃
度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。
注意:zui低檢測限為 1μmol/mL 或 1μmol/g 鮮重或 10nmol/mg prot
過氧化氫含量(H2O2)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),過氧化氫測試盒
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