ELISA檢測試劑盒常見問題及解決建議
Q1稱樣時，樣品是放在管底還是管口，如果放在管口對檢測結(jié)果有什么影響？
答：稱量過程中，樣本應(yīng)盡量稱量在試管底部，若樣本粘附在試管口，會使提取液不能與樣本充分接觸，造成提取不充分，從而影響檢測結(jié)果。
Q2是否可以將樣本提前稱量至離心管放置冰箱冷藏保存，待第二天實驗使用？
答：建議冷凍保存，并注意避免交叉污染。
Q3吸取有機試劑時，有機試劑容易從槍頭滴落，如何避免？
答：吸取有機試劑應(yīng)使用刻度吸管或瓶口分液器。使用移液器吸取有機試劑會導(dǎo)致移液器的損壞，且吸取量不準(zhǔn)確。飽和蒸氣壓越大的液體（易揮發(fā)液體）越容易出現(xiàn)液滴低落的現(xiàn)象，若必須使用移液器吸取，可將槍頭與移液器緊密連接，減輕滴落現(xiàn)象的發(fā)生。
Q4前處理時，樣本離心5分鐘和離心10分鐘有什么區(qū)別？
答：樣本前處理的目的是去除雜質(zhì)以達到試劑盒能夠檢測的狀態(tài)，離心是去除雜質(zhì)的一種手段。離心可以分離液-液，液-固等非均一體系，離心的效果與需要分離的兩相性質(zhì)有很大關(guān)系：若固體樣本的顆粒較小不易分離，則離心所需時間較長；若液體樣本與提取液極性相差較大且不易發(fā)生乳化，則離心所需時間較短。試劑盒說明書中提到的離心時間是經(jīng)過大量實驗驗證所得到的，建議按照說明書操作。
Q5離心轉(zhuǎn)速和離心力有什么區(qū)別？
答：離心轉(zhuǎn)速有相對離心力（RFC，單位g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（rpm，單位r/min）兩種表達方式，兩者換算公式為RFC=1.118*10-6*（rpm）2*r，其中r為旋轉(zhuǎn)半徑。維德維康試劑盒實驗過程中使用的離心力為4000g，應(yīng)避免與4000r/min混淆。
Q6藥物殘留檢測實驗中對水質(zhì)的要求：三蒸水、蒸餾水、純凈水還是去離子水？
答：理論來說這幾種水均可滿足分析要求，但對于某些項目有一定的區(qū)別。建議使用去離子水和三蒸水，蒸餾水和純凈水一般僅用于洗滌液的配置。
Q7器具污染所造成的原因有哪幾種？
答：①檢樣過程中出現(xiàn)含量較高的陽性樣品；
?、趯嶒炂骶邲]有清洗干凈；
③實驗人員用藥污染或其他外源性污染；
?、芨邼舛葮?biāo)品儲備液保存不當(dāng)造成污染。
建議：易被污染或使用周期較長的實驗器具,定期（3-5個月）更新一次。
Q8同一個樣品檢測兩次，檢測值差異較大，可能是由于什么原因?qū)е碌模?/div>
答：正常情況下,板孔間的變異不會對樣本的檢測結(jié)果造成影響，可能造成此結(jié)果的情況有：
?、倌骋粚嶒灢僮髑疤幚戆l(fā)生污染或失誤（稱樣量、添加樣品提取液或有機溶劑的量不準(zhǔn)確，渦動離心提取上層清液時混入大量雜質(zhì)）；
?、谀骋粚嶒灆z測分析過程出現(xiàn)失誤（添加樣品的量，酶或抗體的量，添加AB液或終止液的量不準(zhǔn)）。
Q9藥殘檢測時，樣品前處理過程中所用氮氣可否用壓縮空氣代替？
答：一般情況下，需要檢測的目標(biāo)物是比較穩(wěn)定的藥物，可以用壓縮空氣代替氮氣。如有特殊藥物可能發(fā)生氧化影響檢測結(jié)果，則不可以使用壓縮空氣，具體藥物可向廠家咨詢。
Q10添加回收率實驗中添加濃度如何選擇？
答：添加回收率是驗證整個實驗過程準(zhǔn)確度的指標(biāo)之一。添加濃度的選擇盡量避免在zui低檢測限以內(nèi)或者超出試劑盒曲線外的濃度，建議參照目標(biāo)藥物在相應(yīng)樣品中的判定限、定量限或曲線中間范圍濃度。同時，需根據(jù)具體的添加濃度對所用高標(biāo)進行適當(dāng)?shù)南♂?，保證添加量的準(zhǔn)確性。
添加回收的體積公式:V=C*1000M/P
其中:V為添加的高標(biāo)體積（μl），C為添加的濃度(ppb)，P為高標(biāo)的濃度(ppb)，M為樣本的質(zhì)量(g)。
Q11樣本的吸光度值為什么會超出曲線上zui大ＯＤ值？
答：①標(biāo)準(zhǔn)品回溫時間不夠；
?、跇颖局泻蟹菢颖净|(zhì)的物質(zhì)，如有機溶劑；
?、蹣颖緩?fù)溶液稀釋錯誤或直接用去離子水作為復(fù)溶液；
?、芰銟?biāo)品被污染；
?、莘磻?yīng)時間錯誤；
樣本的抑制率在100%-120%范圍內(nèi)，一般可以初步判斷樣本為陰性。若大部分樣本的抑制率遠超過120%，建議咨詢或重復(fù)實驗。
Q12吹干步驟為什么選擇水浴或金屬浴?
答：有機溶劑的沸點一般在60-90℃不等，為加快有機試劑的揮發(fā)，選擇水浴加熱或金屬浴加熱。加熱溫度應(yīng)根據(jù)待測化合物的性質(zhì)與提取試劑的沸點來確定，若待測化合物熱穩(wěn)定性好，不易降解或變性，可適當(dāng)提高氮吹溫度。建議使用說明書中給出的溫度。
Q13回收率能否驗證實驗過程及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？
答：一般用質(zhì)控樣品（已知濃度的樣品）的實驗結(jié)果來反映檢測的準(zhǔn)確性。在沒有質(zhì)控樣本對照的情況下，空白樣本添加回收率是對操作準(zhǔn)確性、操作環(huán)境及分析試劑的評價指標(biāo)之一。因此，回收率也是實驗成功與否的一個重要判定依據(jù)。
在ELISA檢測方法實際應(yīng)用過程中，回收率只是一個參考指標(biāo)，其值只要穩(wěn)定在一定范圍內(nèi)，檢測結(jié)果即具有參考性。
Q14同一個樣品，*次檢測顯示強陽性，第二次檢測時卻顯示陰性，什么原因？
答：①點樣的過程中出現(xiàn)跳孔；
?、诎蹇壮霈F(xiàn)較大的變異系數(shù)；
?、蹣颖驹谇疤幚磉^程中被污染；
?、軜颖净旌喜痪鶆颉?/div>
建議出現(xiàn)高陽性樣本時應(yīng)保留該樣本液，與重新處理好的樣本液一起點樣分析。
Q15同檢測結(jié)果出現(xiàn)陽性應(yīng)該怎么處理？
答：應(yīng)及時進行復(fù)檢工作。若檢測結(jié)果存在大面積陽性，應(yīng)首先查找原因，并及時復(fù)檢。若復(fù)檢結(jié)果仍為陽性應(yīng)及時保存該樣本，并使用儀器進行確證；如復(fù)檢為陰性，則極大可能*次實驗中存在污染或其他失誤導(dǎo)致假陽性。
Q16冬天實驗室溫度過低可否將試劑盒置于室溫保存？
答：不可以。冬天晝夜溫差的改變也會對試劑盒的性能造成不可逆的傷害，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書規(guī)定保存。
Q17實驗結(jié)果出現(xiàn)白板如何排查問題？
答：出現(xiàn)該問題時要分情況解決：
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線顯色正常，樣本均為陽性：證明試劑盒性能正常，樣本遭到大面積污染或前處理過程出現(xiàn)重大失誤，建議重新取樣做復(fù)檢。
2.整板均不顯色或OD值很低：考慮酶和抗體取用錯誤，點板過程過程中的污染（尤其是洗板過程）或廠家技術(shù)人員協(xié)助找到原因。
更新時間：2018-05-11 
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