超氧化物歧化酶（SOD）分型測(cè)定試劑盒的樣本前處理

（抽提法測(cè) T-SOD 、CuZn－SOD、 Mn-SOD 比色法）

【試劑盒介紹】

本試劑盒采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶

(Superoxide Dismutase SOD)活力，可測(cè)血清(漿)、腦脊液、胸水、

腹水、腎透析液、尿液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、心肌培養(yǎng)

細(xì)胞、腫瘤培養(yǎng)細(xì)胞、各種動(dòng)植物組織細(xì)胞及亞細(xì)胞水平(線粒

體、微粒體)中的 SOD 活力，并可檢測(cè)微生物、藥物、食品、

飲料、化妝品中的 SOD 活力。

【測(cè)定意義】

超氧化物歧化酶（SOD）對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著

至關(guān)重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2－ ·）保護(hù)細(xì)

胞免受損傷

。

【測(cè)定原理】

通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由

基（O2－ ·），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈

現(xiàn)紫紅色，用可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)其吸光度。當(dāng)被測(cè)樣品中含

SOD 時(shí)，則對(duì)超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成

的亞硝酸鹽減少，比色時(shí)測(cè)定管的吸光度值低于對(duì)照管的吸光

度值，通過(guò)公式計(jì)算可求出被測(cè)樣品中的 SOD 活力。

高等動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)只有二種 SOD 即銅鋅-SOD（CuZn-SOD）

與錳-SOD(Mn-SOD),二者相加等于總 SOD（T-SOD），經(jīng)樣本前

處理過(guò)的樣本中 Mn-SOD 活力喪失，但 CuZn-SOD 活力不變。

【有效期和保存條件】

本試劑盒保存期：6 個(gè)月；貯存溫度：4℃，注意 4 號(hào)貯備

液須放在-20℃以下，溫度偏高酶容易失效，所用塑料吸嘴尖要

干凈，最好消毒，或者用雙蒸水將新吸嘴尖頭反復(fù)沖洗，一定

要避免菌類及重金屬離子污染。

【實(shí)驗(yàn)中所需的儀器和自備的試劑】

550nm 的分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、37℃恒溫水浴或氣浴箱、

臺(tái)式離心機(jī)、移液器、雙蒸水、冰醋酸（分析純，乙酸濃度

≥99.5%）。

【試劑組成與配制】

1、（50 管/24 樣，貨號(hào) A001-2-1）試劑的組成與配制：（如您

只需做 CuZn-SOD 則可做到 48 樣）

試劑一：貯備液：5mL×1 瓶（天冷時(shí)或放冰箱會(huì)有部分結(jié)晶

析出，需 37℃加熱溶解后再用）；試劑一應(yīng)用液的

配制：用時(shí)每瓶 5mL 貯備液加雙蒸水稀釋至 50mL，

4℃可保存 1 年。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

試劑四：貯備液：350μL×1 支，-20℃以下保存(如需多次使用,

請(qǐng)?jiān)诘谝淮谓鈨龊蠓盅b保存)；稀釋液：5mL×1 瓶，

4℃可保存 6 個(gè)月。試劑四應(yīng)用液的配制:用時(shí)按貯

備液:稀釋液=1∶14 比例配制，用多少配多少,現(xiàn)用

現(xiàn)配。

試劑五：粉劑×1 支，用時(shí)加入雙蒸水 37.5mL(可在液面位置

標(biāo)記一下)加熱至 70℃～80℃溶解后備用，若加熱過(guò)

程中水分蒸發(fā)減少，此時(shí)必須用雙蒸水補(bǔ)充至標(biāo)記

處，配好后的試劑避光 4℃可冷藏 1 年。

試劑六：粉劑×1 支，用時(shí)加入雙蒸水 37.5mL 溶解后備用，配好

后試劑避光 4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。

顯色劑的配制：按試劑五:試劑六:冰醋酸=3:3:2 的體積比配顯

色劑，用多少配多少，配好的顯色劑 4℃可避光冷藏

3 個(gè)月。

試劑七：20mL×1 瓶；4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。

2、（100 管/48 樣，貨號(hào) A001-2-2）試劑的組成與配制：（如

您只需做 CuZn-SOD 則可做到 96 樣）

試劑一：貯備液, 10mL×1 瓶（天冷時(shí)或放冰箱會(huì)有部分結(jié)

晶析出，需 37℃加熱溶解后再用）；試劑一應(yīng)用液的

配制：用時(shí)每瓶 10mL 貯備液加雙蒸水稀釋至

100mL，4℃可保存 1 年。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃～10℃可保存 1 年。

試劑四：貯備液 350μL×2 支，-20℃以下保存(如需多次使用,

請(qǐng)?jiān)诘谝淮谓鈨龊蠓盅b保存)；稀釋液 10mL×1 瓶，

4℃可保存 6 個(gè)月。試劑四應(yīng)用液的配制:用時(shí)按貯備

液:稀釋液=1∶14 比例配制，用多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)

配。

試劑五：粉劑×1 支，用時(shí)加入雙蒸水 75mL(可在液面位置標(biāo)

記一下)加熱至 70℃～80℃溶解后備用，若加熱過(guò)程

中水分蒸發(fā)減少，此時(shí)必須用雙蒸水補(bǔ)充至標(biāo)記處，

配好后的試劑避光 4℃可冷藏 1 年。

試劑六：粉劑×1 支，用時(shí)加雙蒸水 75mL 溶解后備用，配好后試

劑避光 4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。

顯色劑的配制：按試劑五:試劑六:冰醋酸=3:3:2 的體積比配顯

色劑，用多少配多少，配好的顯色劑 4℃避光可冷藏

3 個(gè)月。

試劑七：30mL×1 瓶；4℃冷藏可保存 6 個(gè)月。

【樣本前處理】

1、取樣本 0.2mL 加試劑七 0.2mL，旋渦混勻器充分混勻 1 分

鐘后，以 3500～4000 轉(zhuǎn)/分，離心 15 分鐘（臺(tái)式離心機(jī)），

取上清進(jìn)行 CuZn-SOD 測(cè)定。此上清液即經(jīng)過(guò)處理后的樣

本，Mn-SOD 活力喪失而 CuZn-SOD 活力不受影響。

2、同時(shí)取生理鹽水 0.2mL 加試劑七 0.2mL，旋渦混勻器充分

混勻 1 分鐘后，以 3500～4000 轉(zhuǎn)/分，離心 15 分鐘（臺(tái)式

離心機(jī)），取上清作 CuZn-SOD 對(duì)照。

注：如樣本量不夠可按比例減少樣本和試劑用量。

 超氧化物歧化酶（SOD）分型測(cè)定試劑盒的樣本前處理