鐵離子檢測試劑盒這么操作更準(zhǔn)確

描述：

鐵是人體必需的元素之一，對(duì)人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會(huì)造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵3～5克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對(duì)照，本試劑盒可進(jìn)行100個(gè)樣品的檢測。

原理：

鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在540-580nm處可比色測定。 其反應(yīng)如下圖所示：

組成：

1. 細(xì)胞裂解液： 20 ml

2. 緩沖液： 5ml

3. 檢測劑： 3ml

4. 標(biāo)準(zhǔn)品： 1ml

5. 稀釋用液： 20ml

儲(chǔ)存：4℃保存，6個(gè)月有效。

適用范圍：該試劑盒可用于培養(yǎng)細(xì)胞中鐵離子定量檢測。

用戶自備：4.5%高錳酸鉀溶液5ml（0.225g高錳酸鉀溶解于5ml純水中）

操作步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備：

實(shí)驗(yàn)建議使用六孔板培養(yǎng)細(xì)胞。將DMEM培養(yǎng)過的細(xì)胞用冷的PBS 2ml洗兩遍，將PBS吸棄（若不馬上檢測可將其凍存于-20℃）。200ul/孔（或根據(jù)實(shí)際情況適量增減）裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解2h。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。

3. 將緩沖液與4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A。

4. 參考下表使用1.5ml離心管，設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。

5. 混勻，60℃ 孵育1h。

6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。

7. 加入30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。此步可能產(chǎn)生絡(luò)合物沉淀，用移液器輕輕吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm離心5分鐘，取上層清液即可。

8. 取200ul 于96孔板，在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測。

9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算鐵離子濃度。

說明：

1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。
2. 操作過程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。

3. 所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測定。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，檢測試劑有腐蝕性，請(qǐng)小心操作，若不慎沾到皮膚上請(qǐng)馬上用清水沖洗干凈。

5. 該試劑盒僅供科學(xué)研究使用。