實(shí)惠又好用的金擔(dān)子素A現(xiàn)貨

上海信帆生物供應(yīng)金擔(dān)子素A，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，現(xiàn)貨供應(yīng)！

金擔(dān)子素A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力。AbA作用機(jī)制是抑制酵母中AUR1基因（1，2）編碼的肌醇磷酰胺（inositolphosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而殺死菌株。AbA在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/mL）即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性。編碼IPC合成酶的基因研究較多的來自釀酒酵母菌的AUR1基因，以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對(duì)編碼AUR1-C基因進(jìn)行突變即可使得菌株對(duì)AbA產(chǎn)生抗性，作為蛋白質(zhì)互作研究的報(bào)告基因。

因?yàn)锳bA可以直接殺死敏感的酵母菌株，而不是延遲菌株生長，所以AbA篩選有利于陽性克隆的生長和識(shí)別。與營養(yǎng)報(bào)告基因（如HIS3）進(jìn)行的低嚴(yán)緊度初篩相比，AbA篩選大大消除了背景克隆。實(shí)際操作中，用AbA進(jìn)行初篩時(shí)會(huì)獲得更多克隆，之后再用4個(gè)報(bào)告子(AUR1-C，HIS3，ADE2和MEL1)進(jìn)行高嚴(yán)緊度的二次篩選以驗(yàn)證陽性克隆。AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記；也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子，可以簡化酵母雙雜交文庫篩選。

二、使用方法：

  1、本品為AbA的甲醇溶液，濃度為1 mg/mL，直接用作儲(chǔ)存液。

  2、滅菌后YPD Agar培養(yǎng)基（PM2020）冷卻至50-55 ℃，加入適量的AbA儲(chǔ)液，倒板備用。

  （AbA工作濃度取決于宿主細(xì)胞的敏感度，見下表） 

  3、制備酵母感受態(tài)細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化，參考SK2400，SK2401。

  4、把100 μl完成轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞懸液涂到含有適量AbA的YPD Agar培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)2-4天。

  5、挑取克隆鑒定，或統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)化效率。

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