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免疫熒光六標(biāo)七色(芯片)

免疫熒光六標(biāo)七色(芯片)
服務(wù)介紹: 
組織芯片的免疫熒光檢測,是將許多不同個體組織標(biāo)本以規(guī)則微陣列方式排布于同一載玻片上,同時進(jìn)行相同指標(biāo)的免疫熒光檢測。組織芯片熒光六標(biāo)實(shí)驗(yàn)是在同一張組織芯片上對六個抗原進(jìn)行同時標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)定性,定位,半定量分析。 組織芯片的免疫熒光檢測,標(biāo)本體積小, 標(biāo)本信息含量大 , 一次性實(shí)驗(yàn)即可獲大量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條件更易控制一致,減少批間批內(nèi)誤差,結(jié)果更準(zhǔn)確。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-11-19
  • 訪  問  量:843
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詳細(xì)介紹

免疫熒光六標(biāo)七色(芯片)

服務(wù)介紹: 

組織芯片的免疫熒光檢測,是將許多不同個體組織標(biāo)本以規(guī)則微陣列方式排布于同一載玻片上,同時進(jìn)行相同指標(biāo)的免疫熒光檢測。組織芯片熒光六標(biāo)實(shí)驗(yàn)是在同一張組織芯片上對六個抗原進(jìn)行同時標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)定性,定位,半定量分析。 組織芯片的免疫熒光檢測,標(biāo)本體積小, 標(biāo)本信息含量大 , 一次性實(shí)驗(yàn)即可獲大量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條件更易控制一致,減少批間批內(nèi)誤差,結(jié)果更準(zhǔn)確。

名稱

規(guī)格

免疫熒光六標(biāo)七色(芯片)

送樣運(yùn)輸要求:

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上,常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋切片。切勿冷凍結(jié)冰,切勿固定時間過長。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。

3、熒光四標(biāo)只能做石蠟包埋切片,不能做冰凍切片和細(xì)胞爬片。

實(shí)驗(yàn)大體流程:

石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第三種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第四種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第五種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第六種一抗——孵育HRP二抗孵育iF700-TSA——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

實(shí)驗(yàn)具體流程:

1、石蠟切片脫蠟至水:依次將石蠟切片放入環(huán)保型脫蠟液I 10min-環(huán)保型脫蠟液I 10min-環(huán)保型脫蠟液III 10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ 5min-蒸餾水洗。

2、抗原修復(fù):組織切片置于盛滿抗原修復(fù)緩沖液PH 6.0 檸檬酸; PH 9.0 EDTA;PH 8.0 EDTA)的抗原修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。維持緩沖液沸騰10min左右,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min(修復(fù)液種類和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定,優(yōu)先推薦PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液)。

3、畫圈, 雙氧水封閉:切片稍甩干后用免疫組化筆在組織周圍畫圈(防止試劑流走),切片平放于避光濕盒滴加3%雙氧水溶液,室溫避光孵育25 min左右,封閉內(nèi)源性過氧化物酶。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

4、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

5、加第一種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于透明濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

6、加對應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后平放于透明濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

7、加iF440-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS)中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF440-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

8、微波處理:組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。

9、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

10、加第二種一抗:在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

11、加對應(yīng)種屬HRP標(biāo)記二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

12、加iF488-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF488-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

13、微波處理:組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。

14、血清封閉:切片平放于透明濕盒(滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

15、加第三種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

16、對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

17、加iF546-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF546-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

18、微波處理:組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。

19、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

20、加第四種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

21、對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

22、加iF594-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF594-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

23、微波處理:組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。

24、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

25、加第五種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

26、對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

27、加iF647-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF647-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

28、微波處理:組織切片置于盛滿PH 6.0 檸檬酸修復(fù)液的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)加熱處理維持沸騰10min左右去掉已經(jīng)結(jié)合到組織上的一抗二抗,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。

29、血清封閉:切片平放于透明濕盒滴加血清室溫封閉30min。一抗是山羊來源用10%兔血清封閉,一抗其它來源的用3%BSA封閉。

30、加第六種一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加用無菌PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于避光濕盒內(nèi)4°C孵育過夜(濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā))。

31、對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。

32、加iF700-TSA:將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加iF700-TSA,避光室溫孵育10min。 孵育完后,將玻片置于TBST中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

33、DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。將玻片置于PH7.4 PBS中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

34、自發(fā)熒光淬滅:切片稍甩干后將切片平放于避光濕盒在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min,流水沖洗10min。

35、封片:將玻片置于PH7.4 PB中在鐘擺搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

36、鏡檢成像:切片置于玻片數(shù)字掃描儀下掃描全景成像。


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